【衡道丨文献】他山之石：首款Claudin18.2靶向药物获批，胃癌治疗新靶点的免疫组化检测该如何进行？

近日，注射用佐妥昔单抗联合方案顺利通过了中国国家药品监督管理局（NMPA）的审批，成为中国首个获批的Claudin18.2靶向治疗药物，为我国胃癌患者提供了一种更加精准靶向的治疗选择。在胃及胃食管交界处腺癌的靶向治疗中，Claudin18.2免疫组化检测已成为进展期/转移性病例相应单克隆抗体治疗的重要一环。然而，当前却并没有关于这一指标检测的相应指南。据悉，目前国内相关学术团队正积极编纂关于Claudin18.2在晚期胃癌检测中的相关共识性文件。

2023年5月至7月，一个来自世界各地的国际性病理医师专家组对51例相应病例HE切片及Claudin18.2免疫组化切片进行了评阅和讨论，最后形成了胃及胃食管交界处腺癌Claudin18.2免疫组化检测的相关共识性意见。目前，相关文献已发表于《Mod Pathol》杂志。

为帮助大家更好的了解相关信息，武汉市黄陂区中医医院病理科王强医师将该文要点编译介绍如下。

 胃及胃食管交界处腺癌免疫组化Claudin18.2评估注意事项

标本要求

1. 对于原发肿瘤的活检标本来说，至少应评估6个组织片；如果组织较少，应对所有取得的肿瘤组织标本都进行检测；

2. 只有浸润性腺癌成分才考虑进行评分；要避开仅有异型增生/非浸润性病变的标本；

3. 至少应评估50个恶性细胞；但积液细胞学标本中建议至少应评估100个恶性细胞；

4. 配对的原发及转移性病变中，Claudin18.2的表达高度一致；选择最适用的标本即可；

5. 混合型腺癌中，选择包括不同表型的有代表性的标本进行检测；

6. 拟做电镜、或未固定的标本，不能做Claudin18.2免疫组化检测。

检测方案要求

1. 免疫组化Claudin18.2的检测应在常规处理的、福尔马林固定、石蜡包埋组织中进行；

2. 未染色的切片（白片）中，抗原稳定性可以至少维持45天；根据每一个实验室的具体验证研究，可以适当延长；

3. 亚基特异性抗体或针对Claudin18全长的抗体都可以得出差不多的结果，因为Claudin18.1亚基在胃组织中的表达可以忽略。

染色结果评估

1. Claudin18.2明确的细胞膜着色（环周、基底侧、或侧方），即可判定相应细胞为阳性；

2. 胞质颗粒状着色判为阴性；

3. 着色强度记为0-3+，无着色为0，弱阳性为1+，中等程度阳性为2+，强阳性为3+；

4. 3+的着色强度，是指（DAB做显色剂的情况下）强棕色着色、低倍镜（5倍物镜）下呈显著鸡笼状分布；

5. Claudin18.2的免疫组化着色在肿瘤内具有高度异质性；

6. 应在低倍镜下全面评估、确定总体的表达情况和表达的异质性；

7. 正常的胃部腺体为Claudin18.2阳性，对于具体标本来说，着色强度呈混合型表现；

8. 如果标本中无任何着色、且无着色的腺癌中内对照的非肿瘤组织无阳性着色，应考虑假阴性；建议重复检测、或（如果可能的话）另选组织块进行检测；

9. 前驱病变（肠化生、异型增生）也可表达Claudin18.2，但不要纳入结果评分；

10. 肿瘤细胞≥75%的呈中至强（2+或3+）阳性细胞膜着色，是临床可以应用相应单克隆抗体佐妥昔单抗（zolbetuximab）治疗的阈值；

11. 对于低黏附性癌来说，免疫组化Claudin18.2评估时强烈建议要结合相应的HE染色切片；

12. 一位病理医师首次评估结果为60-80%的癌细胞为2+或3+时，应由第二位病理医师复阅；

13. 结果不明确的情况下，应解读为不足以得出Claudin18.2免疫组化评分结果，应另选标本再次检测及评分。

结果的报告

1. 用于检测的标本类型（活检标本、还是手术标本），标本的部位（原发灶，还是转移灶；如果是转移灶，需注明部位）；

2. 标本是否充分；如果不充分，注明原因；

3. 检测所用的抗体克隆号以及免疫组化染色方案；

4. 是实验室自建检测项目（Laboratory Developed Test，LDT）、还是伴随诊断（Companion Diagnostic，CDx）；

5. 结果应报告中至强阳性（2+或3+）细胞膜着色的肿瘤细胞所占比例，并备注阳性阈值是这类细胞占比≥75%。

 图例赏析

图1. 免疫组化Claudin18.2着色强度示例。（A）胃癌细胞中，0-3+的示例；（B）非肿瘤的胃部腺体（虚线上部分）为细胞膜强阳性着色，和肿瘤（虚线下部分）中的阴性着色形成对比；（C）非肿瘤的胃部腺体（虚线上部分）为细胞膜强阳性着色，本例肿瘤（虚线下部分）也是阳性着色；（D）正常胃部腺体着色高倍观，细胞膜强阳性，呈鸡笼状分布；（E）萎缩性胃炎标本中，局灶肠上皮化生区域免疫组化Claudin18.2阴性，非肠化腺体为阳性着色。

图2. 胃癌中免疫组化Claudin18.2着色的异质性。（A、B）两例具有显著肿瘤异质性的胃腺癌，部分区域为强阳性着色，而同时有部分区域为完全不着色；（C、D）腺体内免疫组化Claudin18.2着色异质性。

图3. Claudin18.2阳性的转移性腺癌。（A）淋巴结微转移；本例需结合相应的HE染色切片才能准确评估肿瘤范围；转移灶极少，但Claudin18.2却为明确的3+；（B）腹膜转移，转移灶极小；做Claudin18.2评分的话，建议至少应有50个肿瘤细胞供评估（最好100个细胞）。

图4. 免疫组化Claudin18.2评估中可能存在的陷阱。（A）Claudin18.2强阳性的腺癌中，胞质广泛着色，会导致细胞膜着色评估困难；（B）呈胞质颗粒状着色的胃癌；（C）Claudin18.2阳性腺癌中的烧灼假象；（D）无细胞黏液中呈微弱至中等的表达；（E）低级别异型增生，呈弥漫、强阳性着色；（F）低级别和高级别异型增生，着色模式不一致；图中所有上皮成分都有异型增生。

参考文献及书籍：

Fassan M, Kuwata T, Matkowskyj KA, Röcken C, Rüschoff J. Claudin-18.2 Immunohistochemical Evaluation in Gastric and Gastroesophageal Junction Adenocarcinomas to Direct Targeted Therapy: A Practical Approach. Mod Pathol. Published online August 2, 2024.

doi:10.1016/j.modpat.2024.100589