iNKT细胞以CD1d限制性方式“杀死”肿瘤相关巨噬细胞，介导抗肿瘤活性

1.肿瘤相关巨噬细胞（TAM）通过产生IL-6促进神经母细胞瘤的生长。

2.TAM存在内源性CD1d，可以被iNKT细胞特异性识别和杀死，这为iNKT细胞疗法改善神经母细胞瘤提供了良好依据。

神经母细胞瘤是一种起源于神经嵴的生物学异质性肿瘤，是儿童中第二常见的实体瘤，其中45%的患者被诊断为高危型。然而，其促进肿瘤生长的机制至今尚不清楚。越来越多的证据表明，肿瘤相关巨噬细胞（TAM）有助于肿瘤进展，但TAM在神经母细胞瘤中的作用尚未确定。

恒定自然杀伤T（iNKT）细胞是CD1d限制性的先天类T细胞，在人体内表达恒定的Vα24-Jα18基因的T细胞抗原受体（TCR）。在癌症患者中，iNKT细胞数量和功能普遍降低。而激活的iNKT细胞则能够迅速分泌大量免疫调节因子（如IFN-γ），并通过凋亡信号转导途径，释放穿孔素、颗粒酶B和肿瘤坏死因子（TNF-α）等，从而杀伤肿瘤。

无独有偶，近期，一项题为Vα24-invariant NKT cells mediate antitumor activity via killing of tumor-associated macrophages的研究表明，TAM通过产生IL-6促进神经母细胞瘤的生长，这与患者生存期呈负相关。值得注意的是，TAM存在内源性CD1d配体，可以被iNKT细胞特异性识别和杀死，这为iNKT细胞疗法改善神经母细胞瘤提供了良好依据。

现有的研究表明，神经母细胞瘤细胞不表达CD1d，而iNKT细胞却是CD1d限制性细胞，为此研究人员推测肿瘤浸润性iNKT细胞的功能可能取决于其它细胞群。通过对神经母细胞瘤进行染色，他们发现TAM能够低水平表达CD1d，证明iNKT细胞能够与TAM直接接触或靠近TAM。由此判断，巨噬细胞是肿瘤部位iNKT细胞识别的主要细胞群。

TAM在原发性神经母细胞瘤中表达CD1d

接下来，为了测试单核细胞是否具有直接影响神经母细胞瘤存活或增殖的潜力，研究人员将神经母细胞瘤细胞与新鲜分离的外周血单核细胞共培养，有趣的是，他们发现单核细胞能够促进神经母细胞瘤的增殖，并且这一过程是由可溶性因子IL-6介导的。

单核细胞通过产生IL-6促进神经母细胞瘤的生长

为进一步明确IL-6因子对神经母细胞瘤的生长促进作用，研究人员在共培养的情况下加入IL-6抗体，发现单核细胞对神经母细胞瘤细胞的生长促进作用减半。随后，他们在体内水平上进一步进行了验证。通过将神经母细胞瘤细胞单独注射或与单核细胞共同注射至小鼠体内，并伴以生物发光成像监测肿瘤生长，研究人员惊讶地发现——与单独含有肿瘤细胞的异种肿瘤相比，含有单核细胞的异种肿瘤生长速度明显更快，到第28天时，生物发光信号甚至增加了4倍。此外，令人瞩目的是，当注射IL-6抗体后，单核细胞的肿瘤促进作用被阻断近半。

IL-6是单核细胞促进肿瘤生长作用所必需的

至此，研究人员确定单核细胞在体外和体内都能促进神经母细胞瘤细胞的生长，且这种作用取决于IL-6功能的发挥。然而以上的结果仅基于细胞和动物水平，临床上患者的TAM是否真的在肿瘤部位产生IL-6呢？

为解决这一疑惑，他们对转移性神经母细胞瘤患者未经治疗的原发肿瘤进行了 IL-6染色，并证明了TAM是肿瘤中IL-6的主要来源。随后，对129例未经治疗的神经母细胞瘤患者的原发肿瘤标本中的免疫相关基因（如IL-6、IL-6Rα等）进行了表达分析，发现基因的表达量越高，患者预后越差，其中表达值高于中位数的患者5年生存率仅为27%，而表达值低于中位数的患者5年生存率则高达60%。

原发性肿瘤中TAM基因的表达与不良预后相关

总的来说，TAM是IL-6的主要来源，有助于肿瘤生长，并与神经母细胞瘤的不良临床事件有关。那么，TAM又是如何成为iNKT细胞发挥疗效的“媒介”呢？进一步深入调查，研究人员发现iNKT细胞能够杀死高达90%的单核细胞，并且细胞毒性受CD1d的限制，进而发挥抗肿瘤作用。

iNKT细胞选择性“杀死”单核细胞

综上，iNKT细胞对TAM产生细胞毒性，在肿瘤部位杀死促进肿瘤生长的单核细胞。为进一步证明这一结论，研究人员给小鼠移植了神经母细胞瘤，随后静脉注射单核细胞或共注射iNKT细胞，并在48小时后处死小鼠进行分析。

果不其然，和只注射单核细胞的小鼠相比，共注射iNKT细胞的小鼠肿瘤中的单核细胞数量减少近3倍；如若用抗CD1d 抗体预处理小鼠，则会显著增加肿瘤中单核细胞的频率，说明iNKT细胞以CD1d限制性方式诱导单核细胞毒性。

单核细胞频率

此外，他们对小鼠单独注射神经母细胞瘤细胞或共注射iNKT细胞，对其肿瘤生长情况与对照组（注射神经母细胞瘤细胞+单核细胞）进行了比较。与前文结果相一致，iNKT细胞以剂量依赖的方式强烈抑制TAM的促瘤效应，且iNKT细胞疗效受CD1d限制。至此，研究人员得出了一个结论——iNKT细胞可通过杀死促肿瘤生长的TAM间接抑制神经母细胞瘤生长。

iNKT细胞疗法减少了TAM介导的肿瘤增殖

总而言之，这项研究为iNKT细胞疗法治愈神经母细胞瘤提供了思路，相信随着iNKT细胞疗法的临床应用，诸多患者将迎来新的春天！

来源：

微信公众号: 基因启明

参考文献：

Song L, Asgharzadeh S, Salo J, Engell K, Wu HW, Sposto R, Ara T, Silverman AM, DeClerck YA, Seeger RC, Metelitsa LS. Valpha24-invariant NKT cells mediate antitumor activity via killing of tumor-associated macrophages. J Clin Invest. 2009 Jun;119(6):1524-36. doi: 10.1172/JCI37869. PMID: 19411762; PMCID: PMC2689106.