【DBS】干血纸片法（DBS）—实现超快找出法布雷病

法布雷病是一种罕见的X连锁遗传溶酶体贮积症，是由于GLA基因突变导致α半乳糖苷酶A（α-Gal A）活性降低或完全缺乏，造成代谢底物在多脏器贮积，引起多脏器病变甚至引发危及生命的并发症。

尽管法布雷病被定义为罕见病，但由于缺乏确切的流行病学资料，再加之初发症状特异性不高，临床表现多样，可累及多个系统，很容易被误诊或漏诊。因此，早期简便、快速、准确地对法布雷病进行诊断成为正确诊断，挽救患者和家系生命的关键。

盲人摸象：法布雷病可误诊超过14年

由于法布雷病是X染色体连锁遗传疾病，男性患者的女性后代患病风险为100%，男性后代正常；女性患者的男性及女性后代患病风险均为50%^[1]。

图1：遗传图谱^[2]

法布雷病临床表现多种多样，全身多个器官和组织可累及，在不同年龄、不同性别存在较大差异。临床上常表现为神经、肾脏、心脏、皮肤、胃肠道、眼等多脏器受累。

以三己糖酰基鞘脂醇（GL-3）及其衍生物脱乙酰基GL-3（Lyso-GL-3）为主的代谢产物最早在胚胎早期贮积于组织器官。随着生长发育及代谢产物在患者体内的不断贮积，患者多在儿童至青少年时期表现出症状，并随着病程进展而逐渐加重。病情严重者出现心脑血管并发症（如心力衰竭、卒中等）或终末期肾病，甚至过早死亡。

表1：法布雷病受累部位的临床表现^[1] 

由于临床表现缺乏特异性，法布雷病的误诊漏诊非常常见。据数据显示，法布雷确诊患者出现症状至明确诊断时间平均为14.8年，最长可达几十年^[1]。除此之外还有大量患者处于误诊、未确诊状态，使流调患病率数据明显低于新生儿基因筛查患病率数据。为提升鉴别诊断水平，法布雷病的诊断需结合临床表现、家族史、酶活性、基因检测、生物标志物等多类信息。

早期诊断为治疗赢得时间

随着广大医护人员对法布雷病认识的增加及诊断技术的发展，早期诊断为法布雷尽早治疗赢得时间。国内外指南提出，高危人群筛查有助于发现新的法布雷病患者，提高诊断率。尽早发现疾病，尽早开始治疗可有效避免出现严重并发症或死亡发生。

◁ α-Gal A活性检测

该法最为简单快捷。广泛用于法布雷病男性疑似患者，男性疑似患者的α-Gal A活性严重下降或缺失，可提示该患者患有法布雷病。女性患者受X染色体随机失活的影响，α-Gal A活性水平不一，缺乏特异性。 需要结合基因检测、底物及衍生物水平来明确诊断。

◁ GLA基因检测

法布雷病诊断的重要检测手段，可提取外周血、干血纸片法（DBS）样本或头发毛囊等组织的DNA，以帮助明确诊断，确定基因变异类型，帮助判断临床表型和指导家系筛查。对意义不明的基因变异（VUS）的解读还需结合家族史、临床表现、底物及衍生物水平、病理等综合判断。

◁ 生物标志物检测

血浆GL-3是诊断法布雷病的重要生化指标，尤其适用于男性患儿。Lyso-GL-3作为更敏感的特异性生物标志物，有助于区分法布雷病的不同类型，对辅助诊断VUS和监测疾病进展具有重要意义。然而，对女性患儿的诊断中，Lyso-GL-3的假阳性率仍偏高。

图2：法布雷病诊断流程^[1]

除了综合考虑临床表现和家族史等关键信息，诊断法布雷病还需借助一系列检测方法，包括α-半乳糖苷酶A（α-Gal A）活性检测、生物标志物检测、基因检测以及组织病理学活检^[3]。

4）组织病理学活检

组织病理学活检具有辅助诊断意义，可检测受累器官如肾脏、心脏、皮肤或神经组织的病变情况，寻找特异性突变如肾脏病理在光镜下相应组织细胞呈空泡改变，在电镜下相应的组织细胞胞质内充满嗜锇性“髓样小体”。但为有创操作，非必须评估指标。

值得一提的是，其中新兴的干血纸片法（DBS）多指标分析也是一种便携、可及的筛查方法，可实现包括酶学、生物标志物和基因的三联检测。临床操作简便、快速、准确性较高，可提高法布雷病诊断的可及性。

酶学+生物标志物+基因检测三种检测，DBS诊断一步到位

法布雷病确诊困难、诊断时间长，成为法布雷病患者治疗道路上的第一大“拦路虎”。近年来，随着实验室自动化检验技术的发展，DBS在遗传代谢类疾病诊断及筛查中的应用价值日渐突显。

为了降低遗传代谢类疾病误诊或漏诊率，国内外指南均肯定DBS在临床中的地位。DBS既保证了待检测样品的生物稳定性又便于储存和运输，是法布雷病筛查和诊断的有效工具，为提高法布雷病的早期诊断提供强有力的支持。

DBS是一种简单易行的临床血液样本采集和运输技术，仅需通过一张DBS滤纸及6滴末梢血，便可对法布雷病高危患者行筛查和排除，有效减少临床上误诊、漏诊的现象。

1）样本稳定

由于生物材料与与滤纸基质结合，干燥过程中去除了蛋白酶或核酸酶发挥作用所需的水分，DBS能够保证样品中DNA、RNA或蛋白质的稳定性。另外，样本在室温下可保存84天，在45°C的高温下可储存3天，减少样本在采集、运输、检测过程中的可能破坏；

2）采样简便

无需离心和冷冻，自然晾干后能够常温运输和储存，简化院内工作流程。无分离机的科室也能送检，提升消化，急诊科室的检测技术可及性。

图3：采血流程

3）缩短检出周期

由于血斑采样方法简便易行，仅需将新鲜患者全血滴在滤纸上，获得直径约1 cm血斑，于干燥室温环境放置4 h直至干燥，然后将滤纸置于密封塑料袋中保存即可。运输到检测实验室后，通过荧光反应法、串联质谱法等分析干血斑中待检测组分的信息来反映患者的诊断结果，如病毒DNA、代谢产物、酶活性等，检出周期大大缩短^[4]。

图4：DBS操作流程

由此可见，DBS为提高法布雷病的诊断和筛查水平提供了强有力的支持。随着相关检测技术的不断发展，应用和推广DBS技术应将成为规范化诊断及筛查法布雷病的突破口。

综上所述，法布雷病早期临床表现异质性大，易漏诊、误诊，从而延误治疗，早期诊断是实现法布雷病规范化管理的关键。法布雷病的诊断需结合临床表现、酶活性、基因检测、生物标志物等多项指标，以提供全面诊断信息。DBS可简便、快速、准确地进行酶学、生物标志物和基因检测，既保证了待检测样品的生物稳定性，又便于储存和运输，是罕见遗传代谢性疾病筛查和诊断的有效工具。

参考文献:

1. 中国法布雷病专家协作组.中国法布雷病诊疗专家共识（2021年版）[J].中华内科杂志， 2021， 60（4）:10.DOI:10.3760/cma.j.cn112138-20201218-01028.

2. Modrego A， Amaranto M， Godino A， Mendoza R， Barra JL， Corchero JL. Human α-Galactosidase A Mutants: Priceless Tools to Develop Novel Therapies for Fabry Disease. Int J Mol Sci. 2021 Jun 17；22（12）:6518. doi: 10.3390/ijms22126518. PMID: 34204583； PMCID: PMC8234732.

3. 法布雷病全国专家协作组， 中国医药教育协会临床肾脏病学专业委员会. 法布雷病多学科联合全程管理路径[J]. 中华内科杂志， 2023， 62（8）: 949-955. DOI: 10.3760/cma.j.cn112138-20230218-00095.

4. 张惠文，黄永兰，顾学范. 以干血纸片为载体的酶学检测在戈谢病筛查及诊断中的应用[J]. 中华儿科杂志，2015，53（7）:552-554. DOI:10.3760/cma.j.issn.0578-1310.2015.07.018.

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