恒定自然杀伤T（iNKT）细胞通过FcγRII (CD32)途径杀伤CD1d阴性的肿瘤细胞

亮点

1、iNKT细胞依赖自身分泌的抗体（Vα24-Jα18抗体）杀伤CD1d阴性的慢性髓系白血病细胞（K562）：CD107a+ iNKT细胞数量增加近5倍，并产生大量细胞因子（如IFNγ和TNFα）杀伤CD1d阴性的肿瘤细胞，这一过程依赖FcγRII (CD32)的介导。

2、细胞培养基中添加6B11 mAb（Vα24-Jα18抗体）能够加强iNKT细胞对CD1d阴性的肿瘤细胞的杀伤能力；但是6B11 mAb结合后的iNKT细胞并不会杀伤FcγRII (CD32)高表达的正常细胞。

3、动物水平上，接受6B11 mAb注射的小鼠肿瘤生长得到抑制，平均肿瘤重量显著降低，说明6B11 mAb增强了iNKT细胞的抗肿瘤能力。

恒定自然杀伤T（iNKT）细胞属于异源性自然杀伤T (NKT) 细胞群，具有T细胞和自然杀伤 (NK) 细胞的特性，有助于衔接先天和适应性免疫反应。众所周知， iNKT细胞是CD1d限制性T淋巴细胞，可利用恒定的T细胞受体 (TCR，人类Vα24和Vβ11，小鼠Vα14、Vβ8.2、Vβ2和Vβ7)识别特定的脂质抗原，其细胞因子的产生有助于确定免疫反应的进程。iNKT细胞由于其强大的抗肿瘤功效，目前已成为免疫治疗的热点。

普遍研究认为，iNKT细胞能够识别和响应糖脂抗原α-半乳糖基神经酰胺（α-GalCer），产生大量细胞因子（如 IFNγ 和 TNFα），并产生颗粒酶和穿孔素，最终发挥细胞毒性。然而，iNKT 细胞是否能够直接识别并杀死肿瘤靶细胞仍未可知。

近期，一项题为Anti-Vα24Jα18 TCR antibody tunes iNKT cell updates responses to target and kill CD1d-negative tumors in an FcγRII (CD32)-dependent manner的研究表明，Vα24-Jα18 TCR抗体（6B11 mAb）可使iNKT细胞以CD32依赖性方式，对肿瘤细胞产生毒性；此外，6B11 mAb处理的iNKT细胞能够在体内抑制小鼠肿瘤生长、降低平均肿瘤重量。该单克隆抗体疗法有望为多种癌症疾病的治愈提供策略。

首先，研究人员选取了白血病细胞系K562（细胞表面不表达CD1d），发现在不存在CD1d的情况下，iNKT细胞仍可对肿瘤细胞产生毒性。那么，iNKT细胞对肿瘤的直接杀伤作用究竟是因何而起的呢？他们分离了iNKT细胞培养上清液，以除去iNKT细胞产生的可溶性因子，随后将细胞在新鲜培养基中再次培养2天。

令人惊讶的是，与未换培养基的对照组相比，实验组CD107a+细胞数量急剧减少（CD107a的表达可以直接反映NK细胞脱颗粒过程，从而反映其杀伤功能），细胞毒性更低；当研究人员将具有可溶性因子的上清液再次与iNKT细胞共培养后，CD107+ iNKT细胞数量竟增加至53%（对照组仅为11.5%），说明iNKT细胞恢复了较高的脱颗粒活性。

iNKT细胞培养物中的可溶性因子介导iNKT细胞的杀伤力

那么，上清液中的可溶性因子是什么呢？

研究人员发现当上清液中缺失Vα24 mAb时，iNKT细胞失去了对K562细胞脱颗粒的能力，而当可识别Vα24的抗体（6B11 mAb）被再次补加入培养基后，CD107a在iNKT细胞表面的表达以剂量依赖性方式增加，iNKT细胞表现出很强的细胞毒性，并产生了大量针对K562细胞的抗肿瘤因子IFNγ和TNFα。有趣的是，6B11 mAb介导的细胞毒性并不仅针对于K562，其他肿瘤细胞系的结果依旧证明了，iNKT细胞以抗体靶向TCR复合物的方式杀伤肿瘤。

6B11 mAb可诱导iNKT细胞对K562细胞的脱颗粒

接下来一个疑问产生了，6B11 mAb诱导的iNKT细胞毒性机制是什么呢？

他们发现K562细胞的FC受体CD32是iNKT细胞发挥作用的关键。当iNKT细胞在抗CD32 mAb存在下与K562细胞共培养时，CD107a+ iNKT细胞数量从52.8% 显著下降到1.8%，表明iNKT细胞的脱颗粒依赖于CD32；除此之外，NK细胞激活受体（如NKG2D、DNAM1和2B4）以及共刺激分子LFA-1和LFA-2也参与了这一过程。

6B11 mAb处理以CD32依赖性方式诱导iNKT细胞对K562细胞的脱颗粒

巧合的是，除原发性肿瘤细胞外，正常的免疫细胞也表达CD32。iNKT细胞是否会“无差别攻击”正常细胞呢？有趣的是，当6B11 mAb结合的iNKT细胞与单核细胞、B细胞和中性粒细胞共培养时，几乎检测不到CD107a+ iNKT细胞，这表明6B11 mAb处理下，iNKT细胞的脱靶效应极小，不会伤害正常细胞。

表达CD32的正常细胞不会引发iNKT细胞脱颗粒

俗话说“试验见真招”，研究人员采用hIL7 × hIL15 KI NSG小鼠（一种缺乏功能性免疫细胞的小鼠，对其持续供应人源IL7/IL15，从而使小鼠体内仅有iNKT细胞发挥免疫功能）以评估iNKT细胞对体内K562肿瘤细胞的直接影响。与对照组小鼠相比，接受6B11 mAb注射的小鼠肿瘤生长得到了抑制，平均肿瘤重量显著降低，表明6B11 mAb处理增强了iNKT细胞的抗肿瘤能力。

6B11 mAb增强了iNKT细胞的体内抗肿瘤能力

综上，这篇研究揭示了单克隆抗体能够调节体内iNKT细胞活性，增强抗肿瘤功效，最终直接靶向并杀死多种类的肿瘤细胞。随着近年来iNKT细胞疗法的大热，相信在不久的将来，癌症必将不再无药可解！

来源：

微信公众号: 基因启明

参考文献：

Takami M, Aoki T, Nishimura K, Tanaka H, Onodera A, Motohashi S. Anti-Vα24Jα18 TCR Antibody Tunes iNKT Cell Responses to Target and Kill CD1d-negative Tumors in an FcγRII (CD32)-dependent Manner. Cancer Res Commun. 2024 Feb 19;4(2):446-459. doi: 10.1158/2767-9764.CRC-23-0203. PMID: 38319156; PMCID: PMC10875981.