解读《非小细胞肺癌MET免疫组织化学检测和判读标准中国专家共识》

这一共识的草拟和制定由医科院肿瘤医院应建明教授和广东省人民医院吴一龙教授牵头，中国医学科学院肿瘤医院邱田教授、复旦大学附属肿瘤医院李媛教授执笔，以及江苏省人民医院张智弘教授、广东省人民医院张庆玲教授、陕西省肿瘤医院袁勇教授、上海市胸科医院韩昱晨教授、武汉大学人民医院袁静萍教授、河南省人民医院孔令非教授、河北医科大学第四医院刘月平教授、空军军医大学西京医院王哲教授、山西省肿瘤医院郗彦凤教授等13位专家组成员鼎力支持。

该共识致力于规范我国MET免疫组织化学检测和判读标准，推进高质量MET IHC检测，助力MET精准诊疗迈上新高峰。

主要内容

间充质上皮转化蛋白（mesenchymal to epithelial transition factor, MET）是一种多功能跨膜受体酪氨酸激酶，MET基因位于第7号染色体，包含21个外显子和20个内含子，其编码合成的蛋白 c-Met 是可以与肝细胞生长因子（HGF）结合的一种受体酪氨酸激酶。c-Met的结构由α链和β链通过二硫键连接组成，分为胞外域、跨膜螺旋结构域和胞内域。

肝细胞生长因子HGF和c-Met结合以后，紧接着位于C端尾部的残基Y1349和Y1356发生磷酸化，继而募集下游信号传导分子，并激活PI3K/Akt、RAS/MAPK、STAT3/INK等信号通路，从而调节细胞的生长，存活，运动，增殖等一系列生物效应。

c-MET通路正常表达时促进组织的分化与修复，但是，当调节异常时则促进肿瘤细胞的增殖与转移。MET 通路异常激活在许多实体瘤中发生，包括脑癌，结直肠癌、乳腺癌、胃癌、头颈癌、肺癌、肝癌和软组织癌等。

在NSCLC非小细胞肺癌中，MET 的激活途径多样，包括MET基因第14号外显子跳跃突变（MET-14跳突）、MET基因扩增、MET基因点突变、MET基因融合及MET蛋白过表达等。

目前临床主要关注的是MET-14跳突、MET基因扩增和MET蛋白过表达。

MET基因扩增和MET蛋白过表达是晚期EGFR突变NSCLC接受EGFRTKI治疗后耐药的重要机制，也是潜在的治疗靶点。MET基因扩增和MET蛋白过表达是独立的生物标志物，两者并不等同。MET蛋白过表达在中国NSCLC患者中的发生率为17.5%~63.7%，在EGFR-TKI耐药的患者中为30.4%~37.0%。

许多因素都会引起MET激活，如其他致癌驱动基因，缺氧的环境，炎症因子，促血管生成因子和HGF。MET激活状态中最常见的表现就是转录上调引起的蛋白过表达。但将MET蛋白过表达作为激活形式之一目前尚有争议。尽管MET蛋白过表达在肺腺癌中的发生率可高达65%，但并非作为原发致癌驱动因素，更多的时候是作为其他驱动基因激活后产生的二次事件，从而促进肿瘤的生长。

在TATTON、SAVANNAH、INSIGHT、NCT01610336等多项临床研究中，IHC作为MET过表达检测方法被列为入组标准之一。研究结果显示，EGFR-TKI耐药后MET过表达的晚期NSCLC患者能从 EGFR-TKI 联合 MET 抑制剂的双靶治疗中获益，免疫组织化学（IHC）检测MET 蛋白过表达可提高 EGFR-TKI 耐药后MET 抑制剂靶向治疗的潜在获益人群比例。

在临床实践中，MET IHC检测仍然存在较多问题与挑战。包括MET IHC检测的抗体种类繁多、检测流程不同、无统一的判读标准、报告形式各异、最佳的MET过表达阈值确证等。MET 异常形式多样，针对其检测手段也不尽相同。

缺乏统一的判读标准使得临床专家和病理学家在识别MET蛋白过表达时可能出现不一致的结果，这不仅对患者的治疗产生影响，还对临床研究的开展和新的MET靶向药物的开发带来挑战。因此，为提高检测结果的准确性，并精准筛选出潜在获益的患者，最大化其临床获益，出台NSCLC MET IHC 检测和判读标准的专家共识至关重要。

在最新发布的共识当中，主要包括MET 基因扩增/蛋白过表达与 EGFR-TKI 的耐药、MET 蛋白过表达检测的临床意义和适用人群、MET IHC 检测方法和流程、NSCLC MET IHC 检测结果判读标准、MET IHC 检测报告、MET IHC 检测的质量控制六部分内容，形成了以下六条共识：

【共识1】

对于 EGFR-TKI 耐药的晚期 NSCLC 患者，推荐使用 IHC 进行 MET 蛋白过表达检测，同时不要忽略其他耐药机制的检测。

【共识2】

强烈推荐 EGFR-TKI 耐药的晚期 NSCLC 患者使用肿瘤活检组织标本进行 MET IHC 检测。在组织学标本不可获得的情况下，可尝试使用细胞学蜡块标本进行 MET IHC 检测，但在报告中须注明标本类型。MET IHC 检测标本应确保有足够的肿瘤细胞进行评估。

【共识3】

建议使用循证医学证据充足的 IHC 检测平台、抗 MET 抗体和二抗检测试剂，确保其临床有效性。

多种抗MET抗体可用于MET IHC检测，包括单克隆抗体（如SP44、cMET和MET4）、多克隆抗体（如AF276）和磷酸化MET抗体（如pMET Y1349），其中最常用的是兔单克隆抗体SP44。临床试验中常用的MET IHC抗体包括SP44、D1C1、3077抗体等（表1）。

表1 临床试验中MET免疫组织化学染色检测方法汇总

不同抗体的染色性能可能存在一定差异，一致性尚待进一步研究。SP44抗体主要针对MET的细胞内表位，研究表明SP44抗体与RON受体酪氨酸激酶（MST1R，一种与MET最为相似的同源蛋白）并无交叉反应。SP44抗体的染色强度与MET蛋白的表达水平显著正相关，SP44的染色结果与蛋白印迹法、流式细胞检测和mRNA检测结果均具有较好的一致性。这些结果进一步证明了SP44抗体用于MET IHC检测具有较好的特异性和准确性。

在SAVANNAH、TATTON、NCT02099058等多个大型临床研究中，Ventana MET（SP44）IHC检测法均被用作MET过表达的诊断入组标准方法学，这些临床实践证据充分显示出Ventana平台MET（SP44）IHC检测对指导EGFR-TKI耐药后伴MET过表达的晚期NSCLC患者的分层和治疗决策制定具有重要临床意义。

【共识4】

结果判读建议参考 Clinical Score 标准，结合肿瘤细胞胞膜/胞质染色强度以及不同染色强度肿瘤细胞百分比进行综合判读。

MET IHC染色强度和阳性肿瘤细胞比例是判读的关键内容，临床研究中与治疗获益相关的阳性阈值可作为参考。IHC检测中，MET蛋白阳性表现为深浅不同的棕褐色着色，染色强弱与蛋白表达量相关。在NSCLC中，过表达的MET蛋白主要定位于细胞膜，细胞质中也会出现不同程度的表达。

SAVANNAH、INSIGHT、TATTON等研究均采用Clinical Score标准，结合染色强度和阳性肿瘤细胞比例进行MET IHC评分。Clinical Score判读标准见表2和表3，根据染色强度可分为无着色、弱着色、中等着色、强着色4类，分别表现为无染色、浅棕色、棕色和深棕色的胞膜和/或胞质染色。 

表2 染色强度评估标准

表3 MET免疫组织化学评分标准

NSCLC MET IHC染色结果示例见图1~6。因NSCLC组织中MET蛋白的表达常存在明显的异质性，结合染色强度和阳性肿瘤细胞比例的综合评分系统对于异质性较强的样本尤为重要。研究结果也显示，对于同一病例的不同样本采用Clinical Score评分进行判读，虽然特定染色强度的细胞比例可存在一定差异，但并不影响最终判读结果的一致性。

图1~6 非小细胞肺癌MET免疫组织化学染色结果；

图1~6均使用BenchMark Ultra平台、SP44单抗和Optiview显色剂，并参照SAVANNAH研究的检测流程进行染色；

图1. 阳性评分3+，膜染色；图2.阳性评分3+，膜质染色；图3.阳性评分2+，膜染色；图4.阳性评分2+，膜质染色；图5.阳性评分1+，膜染色；图6.阳性评分0，无染色。

考虑不同实验室使用的克隆号和方法学有所差异，如采用共识标准进行判读，建议先行选择合适的对照样本，在对方法学做出合适的调整和优化后，再进行正式检测和判读。

【共识5】

规范的 MET IHC 检测报告应至少包含：

（1）MET IHC 使用的检测平台；

（2）使用的抗体来源及克隆号；

（3）二抗检测试剂；

（4）根据 Clinical Score 判读标准的检测结果，包括 MET IHC 评分以及不同染色强度 MET 阳性肿瘤细胞百分比；

（5）当出现特殊情况时（使用的检测样本为细胞学蜡块标本或仅有胞质染色等），需要进行注释补充说明。 

此外，胞膜表达强弱应作为MET染色结果判读的主要依据，胞质染色则作为辅助判断，对于仅有胞质染色而无胞膜染色的病例，可根据标准进行判读，但需在报告中注明。根据文献报道，MET强染色更常见于胞膜，此外，肿瘤细胞不同的MET阳性染色模式可能与临床疗效具有相关性，与以胞膜为主的染色模式相比，以胞质为主的染色模式可能预后更差。

【共识6】

实验室应做好 MET IHC 检测质量控制工作，包括内部质控和外部质控，应定期参加室间质评活动。

衡道医学是国内领先的综合病理服务机构，旗下拥有上海衡道和北京衡道两大中心实验室，现已通过国际ISO15189 CNAS认证，满分通过多项CAP PT室间质评，具备国际标准的质量体系建设能力。在靶点研究领域，有着丰富的方法学开发和病理判读经验。可为申办方提供病理中心实验室服务，以及临床试验前靶点研究相关病理服务。

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参考资料：

[1] Hang-Ping Yao et al, Progress and challenge in development of biotherapeutics targeting MET receptor for treatment of advanced cancer,Biochim Biophys Acta Rev Cancer . 2020 Dec;1874(2):188425.

[2] Juanjuan Xiao et al, Targeting the COX2/MET/TOPK signaling axis induces apoptosis in gefitinib-resistant NSCLC cells. Cell Death Dis. 2019 Oct; 10(10): 777.

[3] MET免疫组织化学标准化判读专家委员会、中国抗癌协会肿瘤病理专业委员会分子病理协作组. 非小细胞肺癌MET免疫组织化学检测和判读标准中国专家共识（2023版）. 中华病理学杂志 2023 年11 月第 52 卷第 11期.