南中医大附院网药+实验大突破：芪芩护肠方，结直肠癌的"隐形杀手"！

结直肠癌（CRC）作为一种普遍存在的癌症类型，已成为全球范围内癌症相关死亡的第二大主因。炎症性肠病（IBD）在此疾病的发生与发展过程中扮演着不容忽视的促进角色。IBD所引发的非自然慢性炎症环境，为癌症的发展提供了条件。与散发性结直肠癌相较，大肠杆菌相关结直肠癌（CAC）遵循特定的“炎症-异常增生-癌”演变路径，进而引发一系列基因层面的变化。

截至目前，针对CAC的具体药物治疗方案尚未确立。据相关资料表明，通过应用5-氨基水杨酸、叶酸、他汀类药物以及抗TNF药物等化学预防治疗手段，有助于降低CAC的发病风险。尽管如此，仍需进一步的临床试验来充分验证这些化学预防策略在CRC防治中的实际效果与效力。

传统中药（TCM）以其多靶点、低副作用及显著的疗效而备受瞩目。研究证实，多种中药治疗方法在抗肿瘤方面展现出显著效果，涉及肿瘤治疗的多个环节，如促进细胞凋亡、抑制血管生成以及抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。其中，芪芩护肠方（QQHCF）作为南京中医药大学附属医院临床应用的中药方剂，已证实对CAC具有显著疗效。

日前，一篇名为“A network pharmacology approach and experimental validation to investigate the anticancer mechanism of Qi-Qin-Hu-Chang formula against colitis-associated colorectal cancer through induction of apoptosis via JNK/p38 MAPK signaling pathway”的文章评估了QQHCF对CAC小鼠模型的潜在治疗作用，并研究其潜在机制。

图1 论文首页

QQHCF可减轻AOM/DSS诱导的小鼠CAC

为了探究QQHCF在CAC模型中的潜在作用，研究采用AOM/DSS诱导构建了小鼠CAC模型（图2A）。在首个和两个DSS处理周期中，与对照组相比，接受AOM/DSS处理的小鼠出现了显著的体重减轻现象，而QQHCF的介入显著缓解了这一体重下降的趋势（图2B）。与AOM/DSS组相比，QQHCF组的生存率明显上升，结肠长度得到了显著增长（图2C、2E）。在肿瘤负荷方面，AOM/DSS处理的小鼠呈现出肿瘤负荷、数量和大小的显著增加，而QQHCF组则表现出肿瘤数量和每个结肠中的肿瘤更少，以及肿瘤形态更小的趋势（图2D、2F-H）。

图2 QQHCF减轻AOM/DSS诱导的小鼠CAC

HE染色结果显示，AOM/DSS组呈现出显著的肠道结构破坏，并伴有多发腺瘤和腺癌的明显特征。相比之下，QQHCF组在相同条件下并未展现出此类病理改变（图3A）。综合上述分析，证明QQHCF在CAC小鼠模型中具有明确的保护作用。

QQHCF可调控结肠肿瘤组织中的细胞增殖和凋亡

在癌症的发展、进展和治疗过程中，调节细胞增殖与凋亡之间的平衡具有举足轻重的地位。为了评估细胞凋亡状态，研究采用了TUNEL染色技术针对结肠组织细胞进行了检测；同时，为了探究细胞增殖情况，研究还进行了Ki67免疫化学染色分析。结果显示，AOM/DSS组中的TUNEL阳性细胞数量相较于对照组呈现出显著下降的趋势。然而，在QQHCF治疗组中，这一比例得到了明显的提升（图3C）。此外，AOM/DSS处理显著提高了ki67阳性细胞的数量，但经过QQHCF处理的小鼠则表现出了增殖水平的显著降低（图3B）。

图3 QQHCF减轻AOM/DSS诱导的CAC小鼠的病理变化

同时，研究采用qPCR及蛋白印迹法，对细胞凋亡内在途径的关键调控因子进行了表达评估，这些因子包括Bcl-XL、Bcl-2、Bax以及caspase-3。AOM/DSS组中的Bcl-XL与Bcl-2的mRNA表达水平呈现显著上升的趋势（图4A-B）。然而，在QQHCF治疗后，这些表达水平得到了显著的降低。此外，与AOM/DSS组相比，QQHCF组中Bax与pcaspase-3的mRNA表达水平则显著上升（图4C-D）。免疫印迹法的结果亦验证了这一趋势（图4E-I）。由此可见，QQHCF具有通过促进肿瘤细胞凋亡并抑制其增殖，进而抑制肿瘤生长的潜力。

图4 通过测定促凋亡（Bax和Caspase-3）和抗凋亡标记物（Bcl-XL和Bcl-2），QQHCF对AOM/DSS诱导的CAC小鼠结肠组织的影响

QQHCF治疗在体内、外激活JNK/p38 MAPK通路

环境和基因毒性胁迫已被科学验证为能够激活p38和JNK MAPK通路的关键因素。这两种蛋白在癌症的演变与治疗中占据核心地位，主要归因于它们对细胞增殖、凋亡以及分化过程的精细调控。研究显示，激活JNK/p38 MAPK信号通路能够有效抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。通过KEGG分析富集结果，研究观察到MAPK通路在诸多途径中呈现出显著的富集现象。因此，研究进一步探究了QQHCF对MAPK信号通路的具体影响。结肠肿瘤组织的免疫印迹实验数据揭示，QQHCF处理显著提升了CAC小鼠中JNK和p38蛋白的磷酸化水平，然而并未对CAC小鼠中JNK和p38的表达水平产生显著影响（图5A-B）。因此，QQHCF可能通过调控JNK/p38 MAPK信号通路，进而影响细胞凋亡过程。

体内研究报道已证实，JNK/p38 MAPK通路的激活具有促进细胞凋亡并抑制细胞增殖的效应。在此基础上，研究采用了免疫印迹法来检测经QQHCF处理的HT29细胞中JNK/p38 MAPK通路相关蛋白的表达状态。结果表明，在QQHCF治疗后，HT-29细胞中pJNK和p-p38的表达水平在24小时内显著上升（图5C-D）。这一发现与体内研究结果相吻合，进一步证实了JNK/p38 MAPK通路在细胞凋亡和增殖调控中的重要作用。

图5 QQHCF处理激活体内外JNK/p38 MAPK通路

结论

综上所述，QQHCF可以通过激活JNK/p38 MAPK信号通路，改善AOM/DSS诱导的CAC小鼠，促进HT29和HCT116细胞凋亡，为CAC的治疗提供了一种新的途径和机制。

参考文献：

Wu Y, Fang Y, Li Y, Au R, Cheng C, Li W, Xu F, Cui Y, Zhu L, Shen H. A network pharmacology approach and experimental validation to investigate the anticancer mechanism of Qi-Qin-Hu-Chang formula against colitis-associated colorectal cancer through induction of apoptosis via JNK/p38 MAPK signaling pathway. J Ethnopharmacol. 2024 Jan 30;319(Pt 3):117323