【EASL2024速递】聚焦慢乙肝患者HBsAg特异性B细胞

 编者按 

2024年欧洲肝脏研究协会（EASL）年会于2024年6月5日 - 8日在意大利米兰举行，肝霖君将与您分享相关重要内容。

近年来，关于慢乙肝的免疫机制研究已成为热点问题。本次EASL 2024大会摘要上，公布了2篇有关HBsAg特异性B细胞的中国研究，肝霖君整理相关研究数据与大家分享。

研究一

吴超/李婕教授团队：慢乙肝患者B细胞中高表达的CTLA4可能抑制HBsAb分泌

研究方法

在外周血B细胞中进行单细胞RNA测序分析。采用流式细胞术对外周血和肝脏浸润的B细胞进行表征。采用Ca⁺流式法和WB法检测BCR信号通路。为了探讨CTLA4的抑制作用，在体外进行CTLA4阻断试验。建立HBV转导模型后，在B6-Ighm-KO小鼠中注射HBsAg预免疫的CTLA4-/- B细胞，检测HBV血清学指标。采用CO-IP和蛋白质组学分析来探索CTLA4的下游蛋白。

研究结果

CTLA4在慢乙肝患者的B细胞中高表达，特别是HBsAg特异性B细胞。CTAL4在约50%的浸润性HBsAg特异性B细胞中高表达。同时，CTLA4+ HBsAg+ B细胞倾向于表达活化标志物。

GO分析、Ca⁺流式法和WB检测显示，CTLA4+ B细胞的BCR信号缺失。阻断CTLA4可部分恢复缺陷，使B细胞分泌更多的HBsAb。在注射CTLA4-/- B细胞的B6-Ighm-KO小鼠模型中，HBV血清学指标下降。蛋白质组学检测显示，SHIP-1是CTLA4的下游蛋白。

研究结论

慢乙肝患者血液循环和肝脏浸润的B细胞CTLA4表达增加，从而使BCR信号缺失，可能导致慢乙肝感染过程中病毒特异性体液免疫应答缺陷。

研究二

张继明教授团队：获得HBsAg清除的慢乙肝患者中HBsAg特异性B细胞的免疫图谱分析

研究方法

研究纳入42例HBsAg未清除的初治慢乙肝患者（慢性HBsAg+），94例通过干扰素α（IFNα）治疗获得HBsAg清除的慢乙肝患者（慢性HBsAg-），以及20例健康人群对照组（接种或未接种乙肝疫苗）。通过高维流式细胞术检测外周血中记忆B细胞应答的详细特征。用荧光标记的HBsAg诱饵来鉴定和检测HBsAg特异性记忆B细胞（HBs+ Bm细胞）。

研究结果

在接种乙肝疫苗的对照组、慢性HBsAg+和慢性HBsAg-患者之间，HBs+ Bm细胞频率无统计学差异（中位数0.09% vs. 0.14% vs. 0.14%）。同时，在慢性HBV感染的所有临床阶段中，细胞频率也没有显著差异。

HBs+ Bm细胞频率的增加伴随着HBsAb水平的一致升高。与HBsAb < 10 IU/L的患者相比，10 ≤ HBsAb < 500 IU/L的患者该细胞频率有升高的趋势，但无统计学意义。

将慢乙肝患者的HBs+ Bm细胞与非HBsAg特异性Bm细胞的流式细胞结果合并生成复合样本。UMAP显示两者明显分离，表明HBs+ Bm细胞具有不同的免疫图谱。此外，与整体记忆B细胞相比，HBsAg特异性B细胞中BTLA、CD11c、PD-1、CD22和FcRL5等一系列抑制性标志物表达增加，这与其功能受损的初步研究一致。

在比较慢性HBsAg+和慢性HBsAg-患者中的HBs+ Bm细胞时，静息（CD21⁺ CD27⁺）、激活（CD21^- CD27⁺）、非典型（CD21^- CD27^-）和中间状态（CD21⁺ CD27^-）HBs+ Bm细胞的频率无显著差异。此外，慢性HBsAg-患者中T-bet和CXCR5的表达降低。

分析HBs+ Bm细胞的类别转换发现，与慢性HBsAg+相比，慢性HBsAg-患者中IgG⁺ HBs+ Bm细胞的比例有升高的趋势。对于慢性HBsAg-患者，相比于其他两组（10 ≤ HBsAb < 500 IU/L和HBsAb < 10 IU/L），HBsAb ≥ 500 IU/L的患者HBs+ Bm细胞中CXCR5表达较低，IgG⁺比例较高。

研究结论

与整体记忆B细胞相比，HBs+ Bm细胞表现出独特的免疫特性。HBs+ Bm细胞中CXCR5的低表达可能与功能恢复和良好预后有关。

肝霖君有话说

除了T细胞以外，HBsAg特异性B细胞在HBV清除状态的维持中也发挥了重要作用。成人慢乙肝患者的HBsAg特异性B细胞的特点是数量增多、分化异常、耗竭增加。研究一就此进一步探索，结果表明B细胞CTLA4的表达增加可能使BCR信号缺失，最终导致体液免疫应答缺陷。

随着慢乙肝免疫学机制探索的深入，发现通过免疫调节恢复乙肝病毒特异性免疫功能是实现临床治愈的一个重要途径。已有大量研究表明IFNα对免疫系统具有广泛的作用，包括B细胞。慢乙肝患者接受PEG IFNα治疗时HBsAg特异性B细胞的耗竭表型被恢复。同时，PEG IFNα治疗也有利于B细胞亚群重塑，刺激B细胞分化，促进HBsAg清除。研究二则表明，通过IFNα治疗获得HBsAg清除的患者HBsAg特异性记忆B细胞的类别比例有所改变。可见B细胞在慢乙肝的临床治愈中也起着不可或缺的作用，对于免疫学机制的探索也将进一步推动慢乙肝临床治愈率的提升。

参考文献： 

Yin SX, Tong X, Wu C, et al. Highly expressed CTLA4 on B cells defected BCR signal to inhibit the secretion of anti-HBs in CHB patients. EASL2024, Abstract (SAT-423).

Guo YF, Guo Y, Kong YD, et al. Immune profiling of HBsAg-specific B cells in CHB patients with HBsAg loss. EASL2024, Abstract (SAT-399).