J Ethnopharmacol：基于DIA的血清蛋白质组学揭示了加味四物汤对低压缺氧的保护作用

背景：四物汤是一种常见的养血传统方剂，其衍生方剂也被广泛应用于中医临床。然而，SWD及其衍生方对高原引起的血虚血瘀的保护作用鲜有报道，其作用机制尚未完全阐明。

研究目的：探讨添加了桃仁、红花的加味四物汤(MSWD)抗低压缺氧(HH)的药理作用及作用机制。并对MSWD的急性毒性进行了评估，以进一步验证MSWD作为HH治疗候选药物的潜力。

方法：将小鼠随机分为6组：空白对照组(Ctrl)、模型组(Mod)、乙酰唑胺100 mg/kg组(ACZ)、MSWD 5 g/kg组(MSWD-L)、10 g/kg组(MSWD-M)和20 g/kg组(MSWD-H)。在实验中，Ctrl组和Mod组灌胃ddH₂O。其余各组小鼠均给予口服，每天1次，连续7天。除Ctrl组外，其余5组均置于模拟海拔7000 m的低压缺氧模拟室内，连续2天。小鼠在缺氧暴露期间给药一次。末次给药后1 h，各组小鼠置于温度为25 ± 1 °C的水箱中游泳10 min，取外周血作常规血和血流动力学分析。分离血清样品，测定MDA、VEGF及炎症指标的含量。脑组织和肺组织的含水量根据湿重和干重计算。分离肝脏和肌肉，测定肝糖原和肌糖原的含量。采用全自动生化分析仪测定血清、肌肉和肝脏中乳酸(Lac)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素氮(UREAL)和肌酸激酶(CK)的含量。分离红细胞，测定2,3-BPG含量。

将2 μL C57BL/6J小鼠血清样品消化成多肽混合物，LC分离后在Orbitrap Fusion Lumos质谱仪上进行DIA模式分析。肽和蛋白质鉴定被限制在1%的FDR。差异表达蛋白的筛选、相关性分析、层次聚类分析、主成分分析和Mfuzz分析均采用R软件包进行。利用STRING网站分析蛋白-蛋白相互作用网络，并用Cytoscape软件构建。

结果：MSWD通过增加小鼠红细胞数量和改善血流动力学指标，对小鼠急性缺氧暴露具有保护作用。同时，生化实验结果显示，MSWD可减轻小鼠炎症和氧化应激，降低器官损伤生物标志物含量，显著提高小鼠高强度运动能力。

血清DIA蛋白质组学结果显示MSWD干预后蛋白质组学特征发生了显著变化。具体而言，MSWD干预后，氧化应激和泛素-蛋白酶体系统相关蛋白Sod1、Gstp1、Vcp和Usp14下调，表明MSWD的保护作用涉及降低氧化应激和能量消耗。MSWD还通过改变Eno1、Sphk1和Apoa1的表达水平来干预能量代谢和脂质代谢过程，以改善缺氧诱导的疾病。同时，MSWD急性毒性试验未见明显毒性。

结论：MSWD通过改善缺氧引起的能量和脂质代谢紊乱，对HH具有良好的保护作用，支持MSWD作为预防和治疗急性缺氧疲劳的安全候选药物。

原始出处：

Tu B, Wang Y, Wu Z, et al. DIA-based serum proteomics revealed the protective effect of modified siwu decoction against hypobaric hypoxia [published online ahead of print, 2023 Oct 10]. J Ethnopharmacol. 2023;117303. doi:10.1016/j.jep.2023.117303.